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成年小鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞原代培養(yǎng)
發(fā)布時(shí)間： 2024-03-19 點(diǎn)擊次數(shù)： 1268次1. C57小鼠，8-10周，通過(guò)頸椎脫位處死，浸入75%乙醇浸泡5分鐘，轉(zhuǎn)移到通風(fēng)柜中的解剖盤(pán)中。
2. 使用眼科剪和鑷子，使髖關(guān)節(jié)脫臼，保持股骨頭完整。
3. 用止血鉗去除每個(gè)股骨頭的軟骨帽，將組織放入含2%雙抗的PBS中。
4. 用冰冷的含2%雙抗的PBS清洗2-3遍，將關(guān)節(jié)軟骨小心移到2ml離心管中。
5. 用眼科剪刀將軟骨帽剪成約1mm3的碎片，加入3ml預(yù)熱的Collagenase D（1.5mg/ml）。
6. 放入37℃、80rpm的搖床中進(jìn)行第一次消化，時(shí)間2h 。
7. 第一次消化結(jié)束后，加入含血清的培養(yǎng)基終止消化，40um的細(xì)胞篩過(guò)濾后，離心1500rpm，2min。
8. 沉淀用DMEM培養(yǎng)基重懸，計(jì)數(shù)，種植在24孔板中。
9. 在未消化的組織中加入3ml預(yù)熱的Collagenase D，放入37℃、80rpm的搖床中進(jìn)行第二次消化，時(shí)間2h，然后收集細(xì)胞。
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