RNA干擾( RNA interfering，RNAI)現(xiàn)象是指由與靶基因序列同源的雙鏈RNA(DsRNA)弓|發(fā)的基因轉(zhuǎn)錄后的沉默過(guò)程，小干擾RNA特異性介導(dǎo)相同序列的mRNA降解，阻斷相應(yīng)基因表達(dá)。晶萊生物提供的RAN干擾技術(shù)包括化學(xué)合成小RN段( SiRNA)和構(gòu)建載體RNA ( SnRNA)兩種形式。實(shí)驗(yàn)委托者只需提供干預(yù)基因名稱(chēng)或基因序列D，設(shè)計(jì)合適的干預(yù)位點(diǎn)，保證至少有- -對(duì)小RNA有效抑制目的基因表達(dá)，抑制效率不低于70%。
RNA干擾( SiRNA實(shí)驗(yàn))流程
確定干擾基因， 設(shè)計(jì)并合成合適的小干擾RNA (片段型或載體型小干擾RNA)。
預(yù)轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)，進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，摸索轉(zhuǎn)染條件、時(shí)間并進(jìn)行必要的檢測(cè)(WB、PCR等)，確定干預(yù)效果的一對(duì)小RNA。
第三步正式實(shí)驗(yàn)，設(shè)置合理實(shí)驗(yàn)分組，進(jìn)行瞬時(shí)或穩(wěn)定轉(zhuǎn)染。
第四步轉(zhuǎn)染后檢測(cè)，根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求選擇細(xì)胞生物學(xué)檢測(cè)、蛋白檢測(cè)、分子生物學(xué)檢測(cè)等。以研究小干擾RNA對(duì)于細(xì)胞、蛋白或基因功能的影響。RNA干擾( SiRNA實(shí)驗(yàn))檢測(cè)(可根據(jù)委托者實(shí)驗(yàn)需求選擇做)
1.細(xì)胞檢測(cè):細(xì)胞增殖毒性MTT、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞周期、細(xì)胞遷移、細(xì)胞侵襲;
2.蛋白檢測(cè):免疫印跡WB、免疫細(xì)胞化學(xué)ICC、免疫熒光IF、流式細(xì)胞術(shù)FCM、酶聯(lián)免疫EL SIA;
3.分子生物檢測(cè): RT-PCR、實(shí)時(shí)熒光定里PCR、甲基化特異性PCR(MSP); .
4.其他檢測(cè):生化檢測(cè)、酶類(lèi)檢測(cè)、脂類(lèi)檢測(cè)、糖類(lèi)檢測(cè)。