*，使用混合穩(wěn)定株可以獲得多個(gè)不同的單克隆穩(wěn)定細(xì)胞株。因?yàn)榉€(wěn)定整合往往伴隨著插入失活宿主內(nèi)源基因，所以實(shí)驗(yàn)時(shí)通過使用混合穩(wěn)定靠譜的細(xì)胞株，或者對(duì)多個(gè)單克隆穩(wěn)定細(xì)胞株進(jìn)行比較，可以幫助研究人員獲得更的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。篩選穩(wěn)定細(xì)胞株主要有三類方法：

1：?jiǎn)慰寺…h(huán)法

此類方法多用于整合率低的轉(zhuǎn)染方法或者需要得到單克隆細(xì)胞株的實(shí)驗(yàn)。其優(yōu)點(diǎn)在于工作量小，只需將轉(zhuǎn)染或者病毒載體感染后的細(xì)胞按照一定的細(xì)胞密度轉(zhuǎn)移至新皿中，并使用合適的藥物進(jìn)行篩選，后在克隆環(huán)的幫助下對(duì)單克隆細(xì)胞株進(jìn)行挑選，并在新皿中完成擴(kuò)增。

2：96孔單克隆稀釋法

此類方法同樣多用于整合率低的轉(zhuǎn)染方法或者需要得到單克隆細(xì)胞株以及篩選懸浮細(xì)胞穩(wěn)定株的實(shí)驗(yàn)。其優(yōu)點(diǎn)在于，理論上可以得到非常均一的單克隆，同時(shí)可以篩選懸浮細(xì)胞穩(wěn)定株。其缺點(diǎn)在于，工作量比較大。

3：逆轉(zhuǎn)錄病毒混合克隆制備法

此類方法適用于需要制備混合穩(wěn)定細(xì)胞株。優(yōu)點(diǎn)在于可以在短時(shí)間內(nèi)獲得穩(wěn)定細(xì)胞株，同時(shí)也可以隨時(shí)將細(xì)胞稀釋轉(zhuǎn)移至新皿中獲得單克隆細(xì)胞株。傾向于整合于轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)附近的，容易造成下游基因的激活;而整合于轉(zhuǎn)錄活躍基因內(nèi)的，容易導(dǎo)致整合區(qū)基因的插入失活。

總而言之，對(duì)于需要對(duì)細(xì)胞密度和藥物濃度繪制致死曲線并選取合適的細(xì)胞密度和藥物濃度進(jìn)行篩選，一些細(xì)小的密度和濃度差別都會(huì)影響獲取均一的單克隆細(xì)胞株，影響獲取的克隆不純，國(guó)內(nèi)資深的細(xì)胞株含有非整合的細(xì)胞。穩(wěn)定整合的細(xì)胞在這樣一類混合細(xì)胞中，不會(huì)失去生長(zhǎng)優(yōu)勢(shì)。