賴氨酸-瓊脂糖凝膠4B是利用溴化氰法通過賴氨酸的α-氨基將其鍵合在瓊脂糖凝膠上，賴氨酸上游離的ε-氨基和α-羧基可以和一系列的生物分子相互作用。主要用于纖維蛋白溶酶原、血纖維蛋白溶酶原激活劑和核蛋白體核糖核酸的分離以及雙鏈DNA的純化。
賴氨酸-瓊脂糖凝膠4B產(chǎn)品參數(shù)
產(chǎn)品名稱：賴氨酸-瓊脂糖凝膠4B(lysine- Sepharose 4 B)
貨號(hào)：S8911
基質(zhì)：6% 交聯(lián)瓊脂糖凝膠
配基： 賴氨酸
配基密度：4-7μmol/mL
顆粒大?。?5-165μm
每毫升結(jié)合量：0.6mg血纖維蛋白溶酶原
大流速：75cm/h
工作pH：2~11
化學(xué)穩(wěn)定性：在所有的水溶性緩沖液中保持穩(wěn)定；
操作溫度：室溫
賴氨酸-瓊脂糖凝膠4B使用方法
1.裝柱
(1)將所有的試劑和填料達(dá)到室溫.配制初始緩沖液(平衡液)和緩沖液。
(2)根據(jù)柱子大小取所需凝膠的量，清洗掉20%乙醇，抽干，用初始緩沖液(按凝膠：緩沖液=3:1比例)配成勻漿。
(3)將柱內(nèi)及柱子底端用水或緩沖液潤濕并保持一小段液體(液面略高于濾膜)，務(wù)必使底端無氣泡。
(4)用玻璃棒引導(dǎo)勻漿沿著柱內(nèi)壁一次性倒入柱內(nèi)，注意不要使用氣泡。打開柱子出液口，使凝膠在柱內(nèi)自由沉降，連結(jié)好柱子頂端柱頭。
(5)打開蠕動(dòng)泵，讓緩沖液用使用時(shí)流速的1.33倍的流速流過，使柱床穩(wěn)定。用2-3倍柱體積的緩沖液平衡柱子。
2.平衡
讓平衡緩沖液以一定流速流過柱子，到流出液電導(dǎo)和pH不變。
3.上樣
可以根據(jù)上樣物質(zhì)的性質(zhì)選擇合適pH的緩沖液，通常建議使用pH 為7.5的磷酸鹽緩沖液。
4.洗脫
通常使用gao2M濃度的鹽溶液進(jìn)行洗脫，也可以選擇梯度洗脫或者溫度梯度洗脫。
5.再生
再生取決于樣品的性質(zhì)，賴氨酸瓊脂糖4 B可以用2 - 3床體積的高pH值(0.1 M Tris-HCl，0.5 M氯化鈉，pH值8.5)和低pH值(0.1 M醋酸鈉，0.5 M氯化鈉，pH值4.5)交替洗滌再生。重復(fù)3次，緩沖液每次至少5柱床體積。
如果在分離的過程中使用了去垢劑或者變性劑，在再生的過程中也可以使用。
純化纖溶酶原后，應(yīng)該使用pH為7.5的 50 mM(含有1 M氯化鈉和0.2 M ε-氨己酸)的磷酸鹽再生。核酸純化后，用至少5倍柱體積的pH為7.5的的50 mM的磷酸鹽(含2 M氯化鈉)清洗再生。
6.在位清洗
在一些使用的程序中，如果存在不容易洗脫的沉淀蛋白或者脂類物質(zhì)，可以用
0.1%的Triton沖洗一分鐘，清洗完畢后，立刻用至少5倍柱體積緩沖液平衡柱子。
賴氨酸-瓊脂糖凝膠4B注意事項(xiàng)
(1)凍干的賴氨酸瓊脂糖凝膠4B 密封貯存于8°C以下干燥的地方，溶脹的凝膠應(yīng)貯存在4-8°C(保存溶液為20%乙醇)，不能冷凍。
(2)在裝柱、使用和保存柱子的時(shí)候，要避免柱子流干，氣泡進(jìn)入。
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