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*(geneticin, G418)又稱遺傳霉素,是一種氨基糖苷類抗生素, 是細(xì)胞穩(wěn)定轉(zhuǎn)染常用的抗性篩選試劑。G418能阻斷蛋白質(zhì)合成,對(duì)細(xì)菌、酵母、高等植物以及哺乳動(dòng)物細(xì)胞均具有氨基糖苷類毒性,用于真核細(xì)胞從轉(zhuǎn)座子Tn5和Tn601穩(wěn)定轉(zhuǎn)染*(neo)抗性基因的選擇和維持。經(jīng)常用于基因轉(zhuǎn)移、基因敲除、抗性篩選以及轉(zhuǎn)基因動(dòng)物等方面。
Leagene G418溶液經(jīng)過濾除菌,一般工作濃度為50~1000ug/ml不等,然而不同類型的細(xì)胞需要根據(jù)實(shí)驗(yàn)確定jia濃度。在具有相對(duì)穩(wěn)定基因組的細(xì)胞(如CHO細(xì)胞)中,一旦篩選出穩(wěn)定細(xì)胞株后,無需加入G418繼續(xù)培養(yǎng)。
主要成分:主要由G418、HEPES等組成,過濾除菌。
操作步驟(僅供參考):
1、 由于每種細(xì)胞對(duì)G418的敏感性不同,而且不同批次的G418的活性液不同,所以在篩選之前,需要確定G418的jia篩選濃度,一般在50~1000μg/ml范圍內(nèi)進(jìn)行篩選。
2、 將細(xì)胞制備成細(xì)胞懸液,并稀釋到1000個(gè)/ml。
3、 加入不同量的G418 solution (20mg/ml),選擇在10~14天內(nèi)使細(xì)胞全部死亡的低G418濃度來進(jìn)行下一步的篩選試驗(yàn)。
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