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東北大學(xué)的鄭文利博士早在20世紀(jì)末就進(jìn)行了大鼠皮膚凍干的實(shí)驗(yàn)研究。取活大鼠脫頸處死后，立即用電動(dòng)去毛刀去其腹部鼠毛，剝離皮膚，除去皮下脂肪層、血管及殘留物，用蒸餾水沖洗干凈，制成不同尺寸的皮片，再用生理鹽水沖洗數(shù)次備用。將制備好的大鼠皮放在速率降溫儀中，以-5℃/min、-l5℃/min、-30℃/min三種不同速率降溫至-30℃。將三種不同降溫速率預(yù)凍的大鼠皮，分別放入小型凍干機(jī)中抽真空，30min后壓力穩(wěn)定在120Pa,不主動(dòng)加熱，連續(xù)干燥34h后關(guān)機(jī)，充氮?dú)夂笕〕?，用無(wú)菌塑料袋封裝后，放在干燥器內(nèi)保存。

將以不同預(yù)凍速率凍干的大鼠皮膚，經(jīng)10%福爾馬林固定，石蠟包埋制片，進(jìn)行病理切片，切片厚度4～5μm,HE染色，再顯微鏡觀察。新鮮大鼠皮組織切片如圖5-8所示，以5℃/min速率預(yù)凍并凍干大鼠皮組織切片如圖5-9所示。從圖中可以看出凍干皮組織與新鮮皮組織相本相同，未見(jiàn)細(xì)胞破裂、上皮脫離、組織褶皺、細(xì)胞變性和細(xì)胞間隙增寬等異常，說(shuō)明凍干皮組織結(jié)構(gòu)未發(fā)生變化。其他速率預(yù)凍并凍干后的結(jié)果基本一致。

凍干大鼠皮角質(zhì)細(xì)胞間隙脂流動(dòng)性的電子自旋共振(ESR)測(cè)定：選  用5-噁唑氮氧自由基硬質(zhì)酸(5-DSA)作為自旋轉(zhuǎn)標(biāo)記物，將新鮮的和  三種不同預(yù)凍速率的凍干大鼠皮角質(zhì)層樣品泡在濃度為1×10-4mol/L  的5-DSA緩沖液(pH=7.4)中12h，保溫20℃，然后取出淋洗干凈，37℃烘箱干燥1h，分別放進(jìn)電子自旋共振波譜儀樣品管內(nèi)，再置于腔中。ESR測(cè)定條件：掃描寬度200G，接收增益3.2×104，時(shí)間常數(shù)20.48ms，微波功率5.02mW，掃描時(shí)間83.888s，調(diào)制頻率  25.000kHz，調(diào)制幅度0.947G。經(jīng)ESR波譜分析得知，三種不同凍  結(jié)速率預(yù)凍的凍干大鼠皮與新鮮大鼠皮各系數(shù)相比無(wú)顯著差異，說(shuō)明  凍干大鼠皮膚未引起表皮細(xì)胞間脂質(zhì)結(jié)構(gòu)的變化，大鼠表皮角質(zhì)細(xì)胞  間脂質(zhì)排列的有序性沒(méi)有改變，流動(dòng)性沒(méi)有增加。

表5-11中的數(shù)據(jù)表明，在滲透9、10h、12h時(shí)，凍干皮膚與正常皮膚對(duì)藥物尼莫地的滲透量無(wú)顯若性差異。可見(jiàn)，凍干的大鼠皮膚能夠滿足藥理的實(shí)驗(yàn)要求，可用做透皮制的實(shí)驗(yàn)研究，可以長(zhǎng)期貯存?zhèn)溆谩?/span>