薄層色譜法是用于分離混合物的層析技術(shù),利用覆蓋了很薄一層吸附劑的玻璃板、塑料片或鋁箔上進行混合物的分離。薄層色譜法操作簡單,是一種常用的色譜分離方法,下面就簡單介紹一下薄層色譜法的操作方法
1.薄層板:
有市售薄層板(普通或高效板)和自制薄層板,可根據(jù)需要選用。
2.點樣:
通常在潔凈干燥的環(huán)境,用毛細管或配合相應(yīng)的半自動或自動點樣器械將樣品點樣于薄層板上。一般為圓點狀或窄細的條帶狀,點樣基線距底邊10-15mm,高效板一般基線距底邊8- 10mm。圓點狀直徑一般不大3mm,高效板一般不大于2mm。接觸點樣時注意勿損傷薄層板表面。條帶狀寬度一般為5-I0mm,高效板條帶寬度一般為 4- 8mm,可用半自動或自動點樣器械噴霧法點樣。點間距離可視斑點擴散情況以相鄰斑點互不干擾為宜,一般不少于8mm,高效板供試品間隔不少于5mm。
3.展開
將點好供試品的薄層板放入展開缸中,浸入展開劑的深度為距原點5mm為宜,密閉。除另有規(guī)定外,一般上行展開8-15cm,高效薄層板上行展開5 - 8cm。溶劑前沿達到規(guī)定的展距,取出薄層板,晾干,待檢測。
4.顯色與檢視
試品含有可見光下有顏色的成分可直接在日光下檢視,也可用噴霧法或浸漬法以適宜的顯色劑顯色或加熱顯色,在日光下檢視。有熒光的物質(zhì)或遇某些試劑可激發(fā)熒光的物質(zhì)可在365nm紫外光燈下觀察熒光色譜。對于可見光下無色,但在紫外光下有吸收的成分可用帶有熒光劑的硅膠板,在254nm紫外光燈下觀察熒光板面上的熒光猝滅物質(zhì)形成的色譜。
5.記錄
薄層色譜圖像一般可采用攝像設(shè)備拍攝,以光學(xué)照片或電子圖像的形式保存。也可用薄層掃描儀掃描記錄相應(yīng)的色譜圖。
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