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一、簡(jiǎn)介
蛋白質(zhì)的測(cè)定方法，目前仍以1883年凱達(dá)爾氏(Kiedahl)發(fā)明的定氮法為基礎(chǔ)，它根據(jù)各種蛋白質(zhì)都具有固定比數(shù)的氮這一事實(shí)，通過(guò)對(duì)氮的測(cè)定而推算出蛋白質(zhì)含量，此法所得的含氮量除了確定屬于蛋白質(zhì)組成成分的氮以外，還包括非蛋白質(zhì)組成的其他有機(jī)及無(wú)機(jī)態(tài)氮，所以換算所得的蛋白質(zhì)含量稱作為粗蛋白含量，一般蛋白質(zhì)中的含量為18%，換算后即每6.25克蛋白質(zhì)中含有1克氮，因此6.25成為換算系數(shù)K，但是不同的農(nóng)產(chǎn)品及其制品的實(shí)際含氮量有區(qū)別，所以不同農(nóng)產(chǎn)品必須采用不同的換算系數(shù)，如花生、大豆、蠶豆、大麥、小麥、燕麥、黑麥等含氮為17.6%，求得K=5.7，蕎麥、葵花籽、亞麻籽、麻籽、棉花籽、蓖麻籽等換算系數(shù)則為K=5.50，玉米、菜籽為6.00，水稻為5.95，上述以外的其他農(nóng)產(chǎn)品的換算系數(shù)均適用6.25。盡管如此，目前世界上還沒(méi)有直接分離測(cè)定含蛋白質(zhì)的可行方法。因此，迄今為止在國(guó)內(nèi)外凱氏定氮法仍然是測(cè)定蛋白質(zhì)含量的經(jīng)典方法。所得結(jié)果準(zhǔn)確、穩(wěn)定。
山東盛泰儀有限公司生產(chǎn)的全自動(dòng)定氮儀(蛋白質(zhì)測(cè)定儀)，是引進(jìn)消化吸收國(guó)內(nèi)外檢測(cè)新技術(shù)，結(jié)合我國(guó)國(guó)情，應(yīng)用凱氏定氮法原理，采用化學(xué)與物理學(xué)相結(jié)合完成的成套蛋白質(zhì)含量快速測(cè)定裝置。為糧食、食品、飼料、農(nóng)業(yè)、商檢等檢測(cè)部門提供了理想的檢測(cè)設(shè)備。
二、操作方法 山東盛泰儀器有限公司廠家直供
1.試劑制備
A.硫酸(比重1.84)
B.NaOH溶液:400g NaOH 溶于1000mlH2O中
C.2%H3BO3
D.0.1NHCL
E. 催化劑:硒+*(1:1000)或硫酸銅等
F.指示劑:0.1%甲基紅+0.5%溴甲酚綠(1:1)
2.樣品消化
稱取經(jīng)粉碎通過(guò)40-60目/寸樣0.5-1克(視含氮量而定)無(wú)損地置入已洗滌烘干的消化管中加催化劑5克左右和10ml左右硫酸。 將消化管分別放入消化架各個(gè)孔內(nèi)，然后置于消化爐上，然后開(kāi)啟抽氣三通上自來(lái)水，使抽氣三通處于吸氣狀態(tài)，接通電源，在加熱初始階段防止樣品飛濺。(選用電壓型控溫的消化爐起先控制在150伏左右，15分鐘左右后可滿電壓工作)，(選用數(shù)顯型消化爐起先控制在200度左右，20分鐘左右后再設(shè)定所需溫度)。
3.蒸餾(結(jié)構(gòu)圖上有Δ標(biāo)記工作必需做)
(ST-O4A為例)蒸餾器中，堿液及蒸餾水采用電磁泵加入，機(jī)器側(cè)面標(biāo)簽NaOH、H2O注入接口用橡膠管套入后分別置入自備的容器中，加液時(shí)按面板上相應(yīng)開(kāi)關(guān)，液體由泵吸入消化管內(nèi)，注入毫升數(shù)視標(biāo)尺所注位置而定。(一般堿液加量是消化時(shí)硫酸用量5倍以上，加蒸餾水量15毫升左右)
1.打開(kāi)電源，打開(kāi)自來(lái)水，接冷卻水自來(lái)水不必開(kāi)過(guò)大，出水口有水流出即可，用排水管子上夾子夾緊排水管子。
開(kāi)面板上右邊蒸氣開(kāi)關(guān)手柄往上推為開(kāi)蒸氣，同時(shí)把左邊進(jìn)水開(kāi)關(guān)手柄往上推為開(kāi)，待電流表指針指在1A—2A時(shí)如果水進(jìn)入側(cè)面蒸發(fā)爐慢，電流表長(zhǎng)時(shí)間沒(méi)反應(yīng)，請(qǐng)用吸合球往正面的細(xì)長(zhǎng)管內(nèi)吹幾下以排除管內(nèi)空氣，看示意圖指示馬上關(guān)把左邊進(jìn)水開(kāi)關(guān)手柄往下壓，壓到底壓不下為關(guān)(盡量不要關(guān)太慢，防止電流過(guò)大而燒壞15A保險(xiǎn)絲)，待蒸氣管噴出氣后又上推打開(kāi)左進(jìn)水開(kāi)關(guān)供水，2分鐘左右后電流穩(wěn)定在3.5A-6A左右后，關(guān)閉右蒸氣開(kāi)關(guān)手柄往下壓到底，壓不下為關(guān)。因?yàn)榧t色進(jìn)水開(kāi)關(guān)是控制機(jī)器內(nèi)部產(chǎn)生蒸氣的水源開(kāi)關(guān)，從側(cè)面的有機(jī)玻璃窗口內(nèi)可以看到蒸發(fā)爐水位的高低，防止水位過(guò)高，因?yàn)橐婚_(kāi)始水沒(méi)有沸騰，水不斷進(jìn)入，容易使電流過(guò)大而燒壞保險(xiǎn)絲。蒸氣開(kāi)關(guān)是起通斷蒸氣作用，也是水源進(jìn)入蒸發(fā)爐和排除蒸發(fā)爐水(實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí))的排水器件。(如果蒸氣出來(lái)后電流不大請(qǐng)開(kāi)關(guān)一下紅色蒸氣開(kāi)關(guān)會(huì)正常。(上推為開(kāi)，下壓為關(guān))) 2.在250mL三角接收瓶中加入50mL2%H3BO3和2-3滴混合指示劑，蒸餾時(shí)間設(shè)定6-8分鐘，并使接收瓶托架盤往上移，使滴管浸沒(méi)在液體中，然后按時(shí)控開(kāi)關(guān)(也可不用開(kāi))。
3.向上扳動(dòng)側(cè)面紅球手柄把消化管固定在左邊托架上，然后按面板上開(kāi)關(guān)分別加入H2O、NaOH 液體，然后上推蒸氣開(kāi)關(guān)，向試管內(nèi)注入蒸氣，進(jìn)行蒸餾樣品，在接收瓶?jī)?nèi)接收液達(dá)150mL左右時(shí)移下接收瓶，用蒸餾水沖洗滴管口繼續(xù)蒸餾半分鐘，然后取下接收瓶，待滴定用，關(guān)蒸氣開(kāi)關(guān)。第二個(gè)樣品只要放上后，加好液，上推蒸氣開(kāi)關(guān)既可，不要關(guān)電源。
4.滴定.
用0.1NHCL滴定接收瓶?jī)?nèi)的溶液，滴定溶液由綠色變成淡紫色時(shí)為止，記下消耗HCL的毫升數(shù)，按下列式子計(jì)算蛋白含量：
蛋白含量(%)=(V-V0)N 0.014 A 100
————————————
W
式中：V----消耗HCL的毫升數(shù)
V0-----空白實(shí)驗(yàn)時(shí)消耗HCL的毫升數(shù)
N----- HCL的當(dāng)量濃度
0.014----1ml HCL的克當(dāng)量數(shù)
A---固定系數(shù)(6.25、5.7、5.3等)
W----試樣重量g (空白測(cè)定：用0.1克糖代替樣品或不加樣品作空白測(cè)定)
4、關(guān)機(jī)
關(guān)電源、關(guān)水、打開(kāi)排水夾子，兩紅球開(kāi)光上推，取下消化管，擦干凈機(jī)器。
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