HiCynth™三糖鐵瓊脂（微生物培養(yǎng)基）
HiCynth™三糖鐵瓊脂基于葡萄糖、乳糖和蔗糖發(fā)酵和硫化氫生產(chǎn)，用于鑒定革蘭氏陰性腸桿菌。
HiCynth™三糖鐵瓊脂（微生物培養(yǎng)基）
組成：
成分 g/L
HiCynth™蛋白胨1號 16.000
HiCynth™蛋白胨6號 3.000
乳糖 10.000
蔗糖 10.000
葡萄糖 1.000
氯化鈉 4.000
* 3.000
硫酸鐵 0.200
枸椽酸鐵銨 0.300
* 2.000
DL-蛋氨酸 2.000
* 1.000
酚紅 0.024
瓊脂 12.000
zui終pH值（25℃） 7.4±0.2
HiCynth™三糖鐵瓊脂（微生物培養(yǎng)基）
使用指導(dǎo)：
在1000ml蒸餾水中重懸64.52g培養(yǎng)基干粉。必要時加熱以*溶解。混勻并轉(zhuǎn)入試管中。高壓滅菌（15磅121℃，15分鐘）。使培養(yǎng)基斜面定型，并保留拖尾1英寸長。
說明：要得到更好結(jié)果，培養(yǎng)基可10磅115℃，15分鐘滅菌。
原理和說明：
三糖糖瓊脂zui初由Sulkin和Willett1提出，并由Hajna2修改，用于鑒定腸桿菌。該培養(yǎng)基符合APHA的建議，用于檢查肉類和食物產(chǎn)品3，用于檢查牛奶和乳制品4和微生物限度試驗，以確認(rèn)其存在沙門氏菌5,6和鑒定革蘭氏陰性桿菌6,7。HiCynth™三糖鐵瓊脂是采用不含動物和植物蛋白胨的化學(xué)限定成分，以避免動物蛋白胨帶來的牛海綿狀腦?。?/span>BSE）/傳染性海綿狀腦病（TSE）風(fēng)險。
HiCynth™蛋白胨1號和HiCynth™蛋白胨6號提供必要的氮源和碳源的化合物、硫、微量元素和維生素B復(fù)合物，氯化鈉維持培養(yǎng)基的滲透壓平衡。乳糖，蔗糖和葡萄糖是可發(fā)酵的碳水化合物。*和亞鐵離子形成H2S指示劑系統(tǒng)。酚紅是pH指示劑。發(fā)酵葡萄糖的生物體產(chǎn)生各種酸，將培養(yǎng)基的顏色從紅色變?yōu)辄S色。管尾部（發(fā)酵）比斜面上（呼吸）有更多的酸釋放。生長的細(xì)菌由于蛋白胨的氧化脫羧，產(chǎn)生堿性產(chǎn)物。這些堿性產(chǎn)物中和了在尾部產(chǎn)生的大量的酸。因此，孵育后的堿性（紅色）斜面和酸性（黃色）尾部的出現(xiàn)，表明生物體對葡萄糖發(fā)酵，但不能發(fā)酵乳糖和/或蔗糖。除了葡萄糖之外，發(fā)酵乳糖或蔗糖（或兩者）的細(xì)菌，產(chǎn)生大量的酸，而不會使該區(qū)域的pH反轉(zhuǎn)，因此細(xì)菌表現(xiàn)出斜面產(chǎn)酸和尾部產(chǎn)酸。氣體產(chǎn)生（CO2）是通過積聚的氣體逃逸時，在培養(yǎng)基中存在裂紋或氣泡來檢測的。當(dāng)通過幾種細(xì)菌將硫代硫酸鹽還原成硫化氫，并且硫化氫與鐵鹽中的鐵離子結(jié)合生成不溶性黑色沉淀物硫化亞鐵。硫酸氫鈉的還原僅在酸性環(huán)境中進(jìn)行。黑色只在試管尾部出現(xiàn)。HiCynth™三糖鐵瓊脂可和尿素瓊脂/肉湯平行使用，用于區(qū)分沙門氏菌和變形桿菌。反應(yīng)總結(jié)如下：
堿性斜面/酸性尾部——只有葡萄糖發(fā)酵
酸性斜面/酸性尾部——葡萄糖和蔗糖發(fā)酵或葡萄糖和乳糖發(fā)酵或所有三種糖葡萄糖、乳糖和蔗糖發(fā)酵。
氣泡或裂縫存在——氣體生產(chǎn)
黑色沉淀物存在——H2S氣體生產(chǎn)
腸桿菌和產(chǎn)生H2S的沙門氏菌的一些成員在Hicynth™三糖鐵瓊脂上可能不是H2S陽性， 一些細(xì)菌可能在Kligler Iron HiCynth™瓊脂上顯示H2S生成，但不能在HiCynth™三糖鐵瓊脂上顯示H2S生產(chǎn)。 這可能是因為在HiCynth™三糖鐵瓊脂中使用蔗糖，其結(jié)果抑制了細(xì)菌H2S產(chǎn)生的酶途徑。
質(zhì)量控制
外觀
淡黃色至粉色均一松散粉末
成膠性
結(jié)實，相當(dāng)于1.2%瓊脂糖凝膠
制備的培養(yǎng)基顏色和透明度
粉紅色透明溶液至輕微不透明凝膠，在試管內(nèi)形成斜面
pH值（25℃）
7.20~7.60
培養(yǎng)反應(yīng)
35℃-37℃孵育18-24小時
微生物 | 接種量（CFU） | 生長狀況 | 斜面 | 尾部 | 氣體 | H2S |
檸檬酸桿菌ATCC 8090 | 50-100 | 旺盛 | 酸性反應(yīng)，培養(yǎng)基黃色 | 酸性反應(yīng)，培養(yǎng)基黃色 | 陽性 | 陽性 |
產(chǎn)氣腸桿菌ATCC 13048 | 50-100 | 旺盛 | 酸性反應(yīng)，培養(yǎng)基黃色 | 酸性反應(yīng)，培養(yǎng)基黃色 | 陽性 | 陰性 |
大腸桿菌ATCC 25922 | 50-100 | 旺盛 | 酸性反應(yīng)，培養(yǎng)基黃色 | 酸性反應(yīng)，培養(yǎng)基黃色 | 陽性 | 陰性 |
肺炎克雷伯氏菌ATCC 13883 | 50-100 | 旺盛 | 酸性反應(yīng)，培養(yǎng)基黃色 | 酸性反應(yīng)，培養(yǎng)基黃色 | 陽性 | 陰性 |
普通變形桿菌ATCC 13315 | 50-100 | 旺盛 | 堿性反應(yīng)，培養(yǎng)基紅色 | 酸性反應(yīng)，培養(yǎng)基黃色 | 陰性 | 陽性 |
副傷* ATCC 9150 | 50-100 | 旺盛 | 堿性反應(yīng)，培養(yǎng)基紅色 | 酸性反應(yīng)，培養(yǎng)基黃色 | 陽性 | 陰性 |
傷*ATCC 6539 | 50-100 | 旺盛 | 堿性反應(yīng)，培養(yǎng)基紅色 | 酸性反應(yīng)，培養(yǎng)基黃色 | 陰性 | 陽性 |
鼠傷*ATCC 14028 | 50-100 | 旺盛 | 堿性反應(yīng)，培養(yǎng)基紅色 | 酸性反應(yīng)，培養(yǎng)基黃色 | 陽性 | 陽性 |
志賀氏菌ATCC 12022 | 50-100 | 旺盛 | 堿性反應(yīng)，培養(yǎng)基紅色 | 酸性反應(yīng)，培養(yǎng)基黃色 | 陰性 | 陰性 |
大腸桿菌ATCC 8739 | 50-100 | 旺盛 | 酸性反應(yīng)，培養(yǎng)基黃色 | 酸性反應(yīng)，培養(yǎng)基黃色 | 陽性 | 陰性 |
大腸桿菌NCTC 9002 | 50-100 | 旺盛 | 酸性反應(yīng)，培養(yǎng)基黃色 | 酸性反應(yīng)，培養(yǎng)基黃色 | 陽性 | 陰性 |
肺炎克雷伯氏菌ATCC 10031 | 50-100 | 旺盛 | 酸性反應(yīng)，培養(yǎng)基黃色 | 酸性反應(yīng)，培養(yǎng)基黃色 | 陽性 | 陰性 |
儲存和保質(zhì)期
30℃以下密閉保存。配好后的培養(yǎng)基2-8℃保存。在標(biāo)簽上的截止日期前使用。
參考文獻(xiàn)：
1. Sulkin E.S. and Willett J.C., 1940, J. Lab. Clin. Med., 25:649.
2. Hajna A.A., 1945, J. Bacteriol, 49:516.
3. Downes F. P. and Ito K., (Eds.), 2001, Compendium of Methods for the Microbiological Examination of Foods, 4th Ed., APHA, Washington, D.C. 4. Wehr H. M. and Frank J. H., 2004, Standard Methods for the Microbiological Examination of Dairy Products, 17th Ed., APHA Inc., Washington, D.C.
5. Finegold S. M. and Baron E. J., 1986, Bailey and Scotts Diagnostic Microbiology, 7th Ed., The C.V. Mosby Co., St. Louis.
6. Eaton A. D., Clesceri L. S. and Greenberg A. W., (Eds.), 2012, Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater, 22nd Ed., APHA, Washington, D.C.
7. MacFaddin J., 1985, Media for Isolation-C*tion-Identification-Maintenance of Medical Bacteria, Vol. 1, Williams and Wilkins, Baltimore
