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BL21-CodonPlus (DE3)-RIPL感受態(tài)細(xì)胞

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BL21-CodonPlus (DE3)-RIPL感受態(tài)細(xì)胞南京賽泓瑞生物在感受態(tài)細(xì)胞的研發(fā)方面,實力雄厚,擁有了克隆、表達(dá)、酵母和農(nóng)桿菌4大類,共計百余種感受態(tài)細(xì)胞。在電擊感受態(tài)方面,擁有了大腸桿菌 電轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞和農(nóng)桿菌電擊感受態(tài)種類,*提高了客戶在轉(zhuǎn)基因以及文庫構(gòu)建方面的成功率。

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BL21-CodonPlus (DE3)-RIPL感受態(tài)細(xì)胞基因型:

FompT hsdS(rB mB) dcm+ Tetr galλ(DE3) endA Hte [argU proL Camr] [argU ileY leuW Strep/Specr]

BL21-CodonPlus (DE3)-RIPL感受態(tài)細(xì)胞簡要說明:

 BL21-CodonPlus(DE3)-RIPL菌株來源于Stratagene公司的BL21-Gold 菌株,缺少Lon蛋白酶和OmpT蛋白酶,從而減少對重組蛋白的降解,補充大腸桿菌缺乏的4種稀有密碼子( AGA、AUA、CCC、CUA) 對應(yīng)的tRNA (argU、ileY、proL、leuW),提高外源基因,尤其是富含AT-或 GC-的真核基因在原核系統(tǒng)中的表達(dá)水平。
該菌株染色體整合了λ噬菌體DE3區(qū)(DE3區(qū)含有T7噬菌體RNA聚合酶),可同時表達(dá)T7 RNA聚合酶和大腸桿菌RNA聚合酶,可用于pET系列,pGEX,pMAL等質(zhì)粒的蛋白表達(dá),同時具有四環(huán)素,*,*,*抗性。
 BL21- Codon Plus(DE3)-RIPL 感受態(tài)細(xì)胞由特殊工藝制作,經(jīng)pUC19質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率高達(dá)108cfu/μg。

BL21-CodonPlus (DE3)-RIPL感受態(tài)細(xì)胞操作說明:

  1.  取100μl冰上融化的 BL21-CodonPlus(DE3)-RIPL感受態(tài)細(xì)胞,加入目的質(zhì)粒并輕輕混勻,冰上靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰上并靜置2分鐘,晃動會降低轉(zhuǎn)化效率。

  1.  向離心管中加入700μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基(2YT或LB),混勻后37℃,200rpm復(fù)蘇60分鐘。

4. 5000rpm離心一分鐘收菌,留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。

  1.  將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。

 

BL21-CodonPlus (DE3)-RIPL感受態(tài)細(xì)胞注意事項:

  1.   感受態(tài)細(xì)胞在冰上融化。
  2.  混入質(zhì)粒時應(yīng)輕柔操作。
  3.  轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)??上鄳?yīng)減少終用于涂板的菌量。
  4.  誘導(dǎo)時,IPTG濃度可選(0.1-2mM均可)。

5. 為獲得需要量的蛋白,誘導(dǎo)時間,溫度,IPTG濃度需實驗者優(yōu)化。

BL21(DE3)pLysS感受態(tài)細(xì)胞其他*:


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