氧化磷酸化系列/三磷酸腺苷測試盒/微量法是上海酶聯生物為您精心研發(fā)用于實驗方法的生化試劑盒產品，也是您科研路上的好幫手，產品說明資料歡迎您來電索取。

氧化磷酸化系列/三磷酸腺苷測試盒/微量法

產品規(guī)格 :100管/48樣

測試方法：微量法

產品分類：氧化磷酸化系列

產品品牌：mlBio/酶聯生物

產品包裝：液體盒裝

運輸條件：快遞包郵

應用范圍：僅供科研研究使用

保存條件：低溫避光保存

有效期：６個月

說明書 : 咨詢或電詢客服索取

供應商：上海酶聯生物科技有限公司

注    意：正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。

氧化磷酸化系列/三磷酸腺苷測試盒/微量法

測定意義：

線粒體復合體Ⅴ又稱F1F0-ATP合酶，廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞的線粒體中，由F1和F0兩個亞單位組成。該酶利用呼吸鏈產生的質子電化學梯度催化ATP合成，也可逆過程水解ATP。此外，復合體Ⅴ還存在于葉綠體、異養(yǎng)菌和光合細菌中。復合體Ⅴ是線粒體氧化磷酸化和葉綠體光合磷酸化合成ATP的關鍵酶。

測定原理：

復合體Ⅴ水解ATP產生ADP和Pi，通過測定Pi增加速率來測定復合體Ⅴ活性。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

樣本的前處理：

組織、細菌或細胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離：

①準確稱取0.1g組織或收集500萬細胞，加入1mL試劑一和10uL 試劑三，用冰浴勻漿器或研缽勻漿。

②將勻漿600g，4℃離心5min。

③棄沉淀，將上清液移至另一離心管中，11000g，4℃離心10min。

④上清液即為除去線粒體的胞漿蛋白，可用于測定從線粒體泄漏的復合體Ⅴ（此步可選做）。

⑤步驟④中的沉淀即為線粒體，加入800uL試劑二和8uL 試劑三，超聲波破碎（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10秒，重復30次），用于復合體Ⅴ酶活性測定。