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【儀器網(wǎng) 行業(yè)應(yīng)用】疏水色譜是一款通過利用樣品分子與固定相的疏水力作用的不同，用流動(dòng)相洗脫時(shí)，各組分遷移速度不同而達(dá)到分離的目的的分析檢測儀器。一般疏水色譜采用鹽水溶液作為流動(dòng)相，具有對蛋白質(zhì)的回收率高、蛋白質(zhì)變性可能性小等優(yōu)點(diǎn)。由于流動(dòng)相中不使用有機(jī)溶劑，因此能夠保證蛋白質(zhì)固有的活性，是目前較常使用的蛋白質(zhì)分析檢測設(shè)備。
因?yàn)槭杷V的主要分離對象為蛋白質(zhì)，而通常疏水作用色譜固定相的非極性比較弱，因此流動(dòng)相多采用高濃度鹽緩沖液進(jìn)行梯度洗脫。并且，疏水色譜使用時(shí)的分離條件較為溫和，可以避免反相色譜中由于固定相較強(qiáng)的疏水性和有機(jī)流動(dòng)相引起蛋白質(zhì)的不可逆吸附和變性，因此特別適用于活性物質(zhì)的分離與純化。
常見疏水色譜的固定相表面為弱疏水性基團(tuán)，它的疏水性比反相色譜用的固定相低很多，而流動(dòng)相為高離子濃度的鹽溶液。蛋白質(zhì)分子在這樣的固定相和流動(dòng)相中進(jìn)行分配，蛋白質(zhì)分子上的疏水性基團(tuán)和固定相的疏水基團(tuán)作用而被保留。當(dāng)用流動(dòng)相洗脫時(shí)逐漸降低流動(dòng)相的離子強(qiáng)度，洗脫能力增強(qiáng)。利用被分離組分分子表面的疏水微區(qū)、變性后暴露出的疏水殘基，或在高鹽環(huán)境下暴露于分子表面的疏水殘基與固定相的疏水性，配體之間的作用強(qiáng)弱，依次用從高至低離子強(qiáng)度洗脫液可將疏水作用由弱到強(qiáng)的組分分離開。
蛋白質(zhì)分子按其疏水性大小被依次洗脫出來，一般是疏水性較小的蛋白質(zhì)分子先流出。在這樣的高鹽水溶液中，蛋白質(zhì)不會(huì)失活。高濃度鹽與水分子發(fā)生強(qiáng)烈作用，導(dǎo)致疏水分子周圍形成空穴的水分子減少，疏水性分子與介質(zhì)的疏水配基之間發(fā)生結(jié)合。這種疏水作用的大小取決于固定相和溶質(zhì)的極性、流動(dòng)相的組成和濃度。由于各種蛋白質(zhì)表面氨基酸殘基極性不同，因此有可能通過改變固定相的極性和流動(dòng)相的組成從而實(shí)現(xiàn)分離蛋白質(zhì)的目的。
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