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AGL1 電轉(zhuǎn)化感受態(tài)細胞

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AGL1 電轉(zhuǎn)化感受態(tài)細胞南京賽泓瑞生物在感受態(tài)細胞的研發(fā)方面,實力雄厚,擁有了克隆、表達、酵母和農(nóng)桿菌4大類,共計百余種感受態(tài)細胞。在電擊感受態(tài)方面,擁有了大腸桿菌 電轉(zhuǎn)化感受態(tài)細胞和農(nóng)桿菌電擊感受態(tài)種類,*提高了客戶在轉(zhuǎn)基因以及文庫構(gòu)建方面的成功率。

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AGL1農(nóng)桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細胞


AGL1 Electroporation-Competent Cell

產(chǎn)品編碼:                         保存條件: -80℃   
產(chǎn)品規(guī)格:

AGL120×50μl
pCAMBIA2301control vector10ng/ul      10ul

                


AGL1農(nóng)桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細胞基因型:
C58 RecA (rif R/carbR) Ti pTiBo542DT-DNA (strepR) Succinamopine

AGL1農(nóng)桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細胞簡要說明:
 AGL1菌株為C58, RecA型背景,核基因中含有篩選標簽——*抗性基因rif和羧芐*抗性基因carb,為了便于轉(zhuǎn)化操作,此菌株攜帶一無自身轉(zhuǎn)運功能的琥珀堿型Ti質(zhì)粒 pTiBo542DT-DNA,此質(zhì)粒含有vir基因(vir基因是T-DNA插入植物基因組必需的元件, pTiBo542DT-DNA質(zhì)粒自身的T-DNA轉(zhuǎn)移功能被破壞,但可以幫助轉(zhuǎn)入的雙元載體T-DNA順利轉(zhuǎn)移)。
pTiBo542DT-DNATi質(zhì)粒含有篩選標簽:strep,賦予AGL1菌株*抗性,適用于水稻、擬南芥、楊樹等植物的轉(zhuǎn)基因操作,開發(fā)的AGL1電轉(zhuǎn)感受態(tài)特別適用于大質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化:經(jīng)pCAMBIA2301質(zhì)粒(size:11633bp)檢測轉(zhuǎn)化效率可達5×10cfu/μg;經(jīng)pCAMBIA2301-ZH質(zhì)粒(size:40kd)檢測轉(zhuǎn)化效率可達5×103cfu/μg。

AGL1農(nóng)桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細胞操作說明:

1. 0.2cm 電擊杯和杯蓋從儲存液中拿出倒置于干凈的吸水紙上5分鐘,待其瀝干水分,正置5分鐘,使乙醇充分揮發(fā),待乙醇揮發(fā)干凈立即插入冰中,壓實冰面,電極杯頂離冰面0.5cm以方便蓋上杯蓋,冰中靜置5分鐘充分降溫。

  1.  -80℃保存的農(nóng)桿菌感受態(tài)插入冰中5分鐘,待其融化,加入1-5ug質(zhì)粒DNA(質(zhì)粒體積不大于6ul,用試劑盒抽提,雙蒸水溶解),用手管底混勻,立即插入冰中,用200ul槍頭將感受態(tài)-質(zhì)?;旌衔锟焖僖频诫姄舯?,蓋上杯蓋,空管保留待用。
  2.  啟動電轉(zhuǎn)儀,設(shè)置參數(shù):C=25uF,PC=200ohm,V=2400V(此參數(shù)為Biorad *,使用者也可按所用電轉(zhuǎn)儀*的protocol操作),將電擊杯快速放入電轉(zhuǎn)槽中,電擊完成快速插入冰中,加入700ul 無抗生素的LB并轉(zhuǎn)移到感受態(tài)空管中,28℃振蕩培養(yǎng)2~3小時。

4. 6000rpm離心一分鐘收菌,留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應(yīng)抗生素的LBYEB平板上,倒置放于28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)2-3天(當平板只含有50ug/ml kan 時,28℃培養(yǎng)48h即可;平板中同時加入50ug/ml kan,20ug/ml rif 時,需28℃培養(yǎng)60h;如果使用的平板含有50ug/ml rif 則需要28℃培養(yǎng)72-90h)。

 

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